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  • 介绍转染试剂的瞬时转染方法是如何操作的
  • 点击次数:20 发布时间:2019-01-11
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  •   转染试剂是一种非脂质体转染试剂,广泛适用于高效转染各种细胞系,且细胞毒性非常低。由于使用该转染试剂转染时不要求去除血清或培养液,并且转染后也不要求换液去除,因而使用起来非常方便。
     
      转染试剂瞬时转染方法:
     
      1. 接种细胞:转染前一天,用胶原酶消化细胞并计数。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
     
      2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、EZ Trans 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据下表所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释EZ Trans 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。
     
      3. 转染细胞:直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后,添加1/2体积的包含 30%血清的生长培养基。
     
      4. 孵育细胞和分析结果:在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达。请自行确定zui适合检测时间。
     
      转染试剂的使用注意事项:
     
      转染前须保证FuGENE® 6温度已经达到室温,使用前须上下颠倒数次进行简单混匀。建议使用标准的24孔板作为FuGENE® 6转染试剂的支架。请不要将原瓶中的FuGENE® 6进行分装。尽可能减少FuGENE® 6原液与塑料制品的表面接触。不要使用硅化的枪头或离心管。在稀释FuGENE® 6时,请务必保证将FuGENE® 6直接混入培养基,而不要接触到离心管。
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