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  • 用什么方法才能正确的选择标记二抗
  • 点击次数:85 发布时间:2018-11-14
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  •   标记二抗能与抗原特异性结合是可以结合的。如果一抗与将抗原完全结合,则二抗处不会出现结合反应现象,如果一抗不足以将抗原完全结合,则多于抗原会大刀二抗处反应。一抗一般是特异性抗体,二抗一般通用羊抗鼠、羊抗兔之类就可以。但是还需要首先得弄懂抗原、一抗、二抗的相互作用。
     
      标记二抗是能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体的存在,放大一抗的信号。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质,去免疫异种动物,由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。
     
      标记二抗原理:
      是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
     
      标记二抗选择要点:
      1、种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可。
      2、标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗,以与后面的SP结合反应,而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗,如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。
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